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什么是鼠抗赭曲霉毒素A单克隆抗体?山东绿都告诉您

点击次数:138  发布时间:2021-03-17
   由于鼠抗赭曲霉毒素A单克隆抗体快速、低成本、可操作性、灵敏度和选择性等优点,免疫分析法被广泛用于检测食品和环境中的污染物。以大限度地提高检测灵敏度已成为免疫测定方法的研究热点。就免疫分析原理而言,提高检测灵敏度主要有两种方法。开发各种抗原与抗体相互作用的信号放大系统是一种常见且有效的提高灵敏度的策略,如荧光底物信号放大和化学修饰信号放大。另一种提高抗体对抗原的亲和力。传统抗体通过免疫动物产生的亲和力提高受到免疫耐受的限制。由于其复杂的结构,这些抗体也不适合体外亲和成熟。相比之下,便于基因操作的基因工程抗体非常适合高亲和力的抗体在体外成熟基因工程和蛋白质工程的进步,如单链可变片段和单域抗体(sdAb)。sdAb又称纳米体(nanobody,Nb),由于其纳米尺度的大小、良好的水溶性和对恶劣环境的高耐受性,而因此具有很高的研究价值。sdAb通常来源于骆驼科的重链抗体和软骨鱼的免疫球蛋白新抗原受体的可变区域,分别命名为VHH和VNAR。从三种噬菌体显示的sdAb文库中可以筛选出特异性的sdAb,包括免疫文库、天然文库和半合成/合成文库。免疫库通常用于筛选高亲和力的sdAbs,目前已有大量的sdAbs被开发用于食品和环境检测分析。此外,sdAbs的单区域特性有利于基因修饰,不同工程化的sdAbs包括体外抗体成熟提高亲和度的sdAbs、融合酶的sdAbs、带肽标记的sdAbs。如体外亲和成熟的sdAb,研究表明,定向修饰获得突变体sdAbN-28-t102y,该突变体亲和度比亲本sdAbN-28高3.2倍,在90℃,热处理5分钟后性保持55%。
  体外诱导鼠抗赭曲霉毒素A单克隆抗体亲和成熟的方法有很多,包括易错PCR、DNA重组、链重组、UV或化学诱变等。但突变的随机性使选择费时费力,限制了这些方法在体外抗体亲和成熟中的广泛应用。将计算模拟与高通量筛选技术相结合,可以高效获得亲和力更高的配体结合蛋白。蛋白质三维结构的准确性是计算模拟蛋白质与配体相互作用的关键。获得蛋白质的三维结构的方法有很多种,如x射线晶体学、核磁共振光谱和冷冻电镜等。然而,由于成本高、实验条件苛刻、过程耗时、劳动密集型,这些方法没有得到广泛应用。蛋白质同源建模是一种简单有效的为结构未知的给定蛋白提供结构模型的方法。比对搜索工具(BLAST)用于搜索同源序列,然后通过服务器建模,如SWISS-MODEL、3D-Jury、I-TASSER和MODELLER瑞士模型。此外,SWISS-MODEL将定性模型能量分析(QMEAN)估计与质量估计(GMQE)评分相结合,提供了一种综合的质量评估,有助于获得更准确的模型。此外,利用同源建模和分子对接的组合策略可以预测蛋白功能,分析抗体和抗原的分子间相互作用,这将有助于提高重组抗体在体外成熟的亲和力。
  研究表明,鼠抗赭曲霉毒素A单克隆抗体通过同源建模、分子对接和丙氨酸扫描来识别用于OTA的sdAbNb28中的4个关键氨基酸(Gly53、Met79、Ser102和Leu149)。这些氨基酸配对组成两个two-site饱和突变库,突变后的Nb-G53Q&S102D亲和力高于1.36倍。结果表明,同源性建模和分子对接结合丙氨酸扫描和双位点突变适用于生成提高sdAbs亲和力。由于sdAbs具有纳米尺寸、单畴、易于表达等优点,应用核磁共振、x射线晶体结构分析、低温电子显微镜等技术可以有效地获得sdAbs的准确结构,并准确分析sdAbs与靶分子的相互作用。相比之下,目前使用的同源建模和分子对接方法成本低、省时。因此,本研究为提高AOA-sdAb的结合亲和力提供了有效策略。
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